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H2S 含量測定試劑盒說明書

更新時間：2019-12-27　點擊量：2469

H2S 含量測定試劑盒說明書

可見分光光度法

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

產品內容：

提取液：液體50mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 25mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 15mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑四：液體15mL×1 瓶，4℃保存。

試劑五：液體 3mL×1 管，4℃避光保存。

產品說明：

H2S 是一種新型氣態信號分子，存在于腦內的神經遞質，生理濃度的 H2S 對神經系統海馬的長時程增強功能具有重要的調節作用，并對自發性高血壓、出血性休克及肝硬化等疾病的過程發揮著重要的病理生理效應。

H2S 與醋酸鋅、N, N-二甲基對苯二胺和硫酸鐵銨等反應生成亞甲基藍，亞甲基藍在 665nm處有大吸收峰，通過測定其吸光值可計算 H2S 含量。

需自備的儀器和用品：

天平、低溫離心機、可見分光光度計1ml玻璃比色皿、蒸餾水。

操作步驟：

一、樣品處理：

1. 組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2. 細菌、真菌：按照細胞數量（10 ⁴個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7秒，總時間 3min）；然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。

3. 血清（漿）：直接測定。

二、測定步驟：（取1.5ml離心管，按照下表操作）

	空白管	測定管
樣品（μL）		250
H2O（μL）	250
試劑一（μL）	250	250
充分震蕩混勻
試劑二（μL）	250	250
12000rpm，4℃，離心 10min，去上清，留沉淀
H2O（μL）	500	500
12000rpm，4℃，離心 10min，去上清，留沉淀
試劑一（μL）	250	250
試劑三（μL）	250	250
充分震蕩混勻
試劑四（μL）	250	250
12000rpm，4℃，離心10min，取上清
試劑五（μL）	50	50
混勻，25℃靜置20min，于微量石英比色皿/96孔板中，空白管調零，測定665nm吸光值，記為A665。

三、H2S含量計算公式：

標準曲線回歸方程為：y = 0.0044x，R²= 0.9988

（1）組織樣品

a.按照蛋白濃度計算

H2S（μmol/mg prot）= A665÷0.0044×V反總÷(V樣×Cpr)×10^-3=0.727×A665÷Cpr

b.按照樣本重量計算

H2S（μmol/g）= A665÷0.0044×V反總÷(V樣÷V樣總×W)×10^-3 = 0.727×A665÷W

（2）液體樣本

H2S（μmol/L）= A665÷0.0044×V反總÷V樣= 727×A665

（3）細胞

H2S（μmol/10⁴ cell）= A665÷0.0044×V反總÷（V樣÷V樣總×細胞數量(萬個)）×10^-3 =0.727×A665÷細胞數量（萬個）

V反總：反應總體積，0.8mL；V樣：反應中樣品體積，0.25mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣品質量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/mL。